二代測序(Next-Generation Sequencing,NGS)是指使用高通量平臺同時對大規(guī)模DNA或RNA進行快速、準確、低成本的測序技術(shù)。在這個過程中,二代測序酶起到了重要作用。
二代測序酶主要分為兩類:聚合酶和核苷酸轉(zhuǎn)移酶。
1. 聚合酶
聚合酶是進行DNA擴增的關(guān)鍵工具,在PCR (Polymerase Chain Reaction) 過程中發(fā)揮著重要作用。其中最常見的是Taq DNA polymerase和Phusion DNA Polymerase兩種。
Taq DNA polymerase即熱穩(wěn)定型聚合酶,能夠耐受較高溫度條件下的反應(yīng),并且擴增產(chǎn)物含有A尾巴(Adenines),適用于目標片段長度較短且含有AT富集區(qū)域時使用;而Phusion DNA Polymerase則由多個不同來源的DNA polymerases組成復雜結(jié)構(gòu)體系,在保證特異性與靈敏度基礎(chǔ)上, 具備更好的擴增效率、精準性及拓展模板長度等優(yōu)點。
2. 核苷酸轉(zhuǎn)移 酶
核苷轉(zhuǎn)移脫氧核糖體(Nucleotide Transfer and Deoxyribonucleotide Transfer)也稱為內(nèi)切酶,是一類蛋白質(zhì)酶,在DNA測序過程中扮演著重要的角色。這些內(nèi)切酶可以短小地識別和結(jié)合到DNA上,并在特定核苷酸位點處水解化學鍵,釋放出部分堿基或其它標記物。
總之, 二代測序酶作為高通量平臺進行快速、準確、低成本的基因組學研究所必備的關(guān)鍵工具, 具有極其重要和不可替換的作用。